Próbki deproteinizowano stałym kwasem sulfosalicylowym i przechowywano w -20 ° C do czasu analizy. Zmierzone dwusiarczki metioniny, homocystyny i homocysteiny-cysteiny zmierzono w próbkach odbiałczonej surowicy za pomocą chromatografii jonowymiennej z analizatorem aminokwasów Locarte. Jako wzorzec wewnętrzny stosowano norleucynę (Sigma), a wzorzec mieszany dwusiarczkowy wytworzono zgodnie ze sposobem opisanym przez Frimpter38. Hydrat triketohydrindenu (Ninhydryna) zastosowano jako odczynnik wykrywający. Całkowite stężenie homocysteiny niezwiązanej z białkiem obliczono jako dwukrotne stężenie homocystyny (homocysteina-homocysteina) plus stężenie dwusiarczku homocysteiny-cysteiny.24 Zewnętrzną kontrolę jakości przeprowadzono w niezależnym laboratorium przesiewowym dla aminokwasów (Uniwersytet College Hospital, Londyn) poprzez jedno-ślepe bezpośrednie porównanie powtórzonych analiz próbek równych 23 próbom obejmującym zakres wartości. Istniała ścisła korelacja między wynikami w dwóch laboratoriach (r = 0,9). Powtarzalność w obrębie laboratorium została określona na podstawie podwójnej analizy danych dotyczących 14 pacjentów. Współczynnik korelacji był ponownie wysoki (r = 0,9). Rysunek 1. Rycina 1. Poziomy homocysteiny w surowicy w hemocycybach o niskim powinowactwie do niedoboru .-syntazy cystationiny, pacjenci normalni i pacjenci z mózgową, obwodową lub wieńcową chorobą naczyń. Pokazane wartości to najwyższy poziom obciążający po metioninie poziom nie-białkowej homocysteiny u każdego osobnika. Linia przerywana o wartości 24 .mol na litr przedstawia poziom, powyżej którego pacjenci byli uznawani za hiperhomocysteinemię. I słupki oznaczają średnie . SD wartości logarytmicznych. Wartości poniżej trzech grup z chorobą naczyń wskazują na odsetek pacjentów z hiperhomocysteinemią.
Na rycinie przedstawiono rozkład szczytowych poziomów nieocukrzonego homocysteiny w surowicy po obciążeniu metioniną u 25 obligatoryjnych heterozygot i 27 zdrowych osób. Punkt Cutolfa równy 24,0 .mol na litr (<24,0 vs. . = 24,0) miał czułość 92 procent i swoistość 100 procent w odróżnianiu obligatoryjnych heterozygot od normalnych osobników. Ten punkt odcięcia został oparty na maksymalnej wartości sumy czułości i swoistości dla wszystkich możliwych punktów odcięcia i został wybrany jako poziom diagnostyczny. Kobiety w wieku przedmenopauzalnym mają niższe poziomy homocysteiny w surowicy niż inne podmioty 24, ale było ich zbyt mało w naszym badaniu, aby uzasadnić ustalenie oddzielnej wartości odcięcia.
Test .-syntazy cystationiny
Figura 2. Figura 2. Aktywność .-syntazy cystationiny w hodowanych fibroblastach skóry od 23 pacjentów z chorobą naczyń i hiperhomocysteinemią oraz w dwóch grupach porównawczych. Normalny zakres aktywności został określony w osobnym, niepublikowanym badaniu 46 osób zdrowych i 14 obligatoryjnych heterozygot na niedobór .-syntazy cystationiny. I słupki oznaczają średnie . SD wartości logarytmicznych. Przerywana linia przy 1,96 nmola na godzinę na miligram białka komórkowego reprezentuje dolną granicę normy (średnia -1.96 SD średniej wartości logarytmicznej u zdrowych osobników).
Wszyscy pacjenci z chorobą naczyń, u których wykryto hiperhomocysteinemię zostali poproszeni o poddanie się biopsji skóry w celu określenia poziomu aktywności .-syntazy cystationiny; 28 zgodziło się na procedurę
[więcej w: galgant cena, medyk rzeszów rejestracja, lista oczekujących na sanatorium nfz ]
